USO DE BACTERIAS BENEFICIOSAS EN LA LARVICULTURA DEL CAMARON Penaeus schmitti.

Elvira Alfonso1, 2, Elpido Beltrame 2, Edemar R. Andreatta 2, Alitiene Lemos 2 y Jair Quaresma 2.



1. Centro de Investigaciones Marinas, Universidad de La Habana, Cuba.
2. Laboratório de Camarões Marinhos, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal de Santa Catarina, Brasil.

 Trabajo aceptado para publicación en Agosto/96 en la Revista de Investigaciones Marinas (edita conjuntamente por la Universidad de La Habana, Cuba y la Universidad Nacional Atónoma de México).

Attempted English translation at: http://www.alken-murray.com/shrimp6e.htm


Resumen
Recientemente han aparecido en el mercado microorganismos vivos que actúan como degradadores biológicos de resíduos orgánicos en Acuicultura. Se probó el efecto de dos productos en la cría de larvas del camarón blanco Penaeus schmitti, que es cultivado a nivel comercial en Brasil y en Cuba. Se evaluaron dosis, así como la acción de los productos sobre la calidad del agua y sobre el posible control del síndrome de descamación del epitelio del tracto digestivo de los animales, conocido como "Bolitas". Se tomaron en cuenta la supervivencia, la velocidad de metamorfosis, la calidad de las larvas y el crecimiento alcanzado hasta postlarva1. Se concluyó que los productos pueden ser suministrados desde Protozoea I . Los mismos posibilitaron la reducción de la tasa diaria de renovación del agua de 100% para 30% en la larvicultura, además evitaron la aparición del síndrome de descamación del epitelio digestivo de las larvas. Estos productos presentan buenas perspectivas de éxito actuando en la optimización de la producción de postlarvas de P. schmitti.
Palabras claves: Peneidos, larvicultura, bacterias beneficiosas.


USE OF BENEFICIAL BACTERIA IN THE LARVAL REARING OF THE SHRIMP Penaeus schmitti.

Abstract

Recently, some live microorganisms have appeared on the market designed as waste degraders for Aquaculture. The effect of two products on the larval rearing of the white shrimp Penaeus schmitti was tested. This species is commercially cultured in Brazil and Cuba. Dosages were evaluated, the products' role in water quality and the possible control of the gut epithelium scaling syndrome of the animals, known as "Bolitas", were studied. In order to analyze the results, the following have been considered: survival, metamorphosis rate, larval quality and size of the postlarva1. It was concluded that the tested products can be used even with the Protozoea I stage. This has enabled the daily water exchange rate to be reduced from 100% to 30% in the larval rearing process and prevention of gut epithelium scaling syndrome in the larvae. These products look promising for optimizing P. schmitti postlarvae production.

Key words: Peneids, larval rearing, benefic bacteria.


A medida que se han desarrollado métodos más intensivos de larvicultura se han visto incrementadas las enfermedades. Todas las publicaciones referentes a las mismas concuerdan en que lo principal para evitarlas es mantener un buen manejo de la larvicultura unido a un control sanitario estricto, así como a un monitoreo constante para mantener una ecología equilibrada del reservorio.
Hasta hace unos años, el único método comúnmente practicado para el manejo de las problaciones de bacterias y la flora bacteriana indeseable era el uso de antibióticos y quimioterapeúticos. Una serie de dificultades que se derivan de su utilización, tales como, la resistencia que crean las bacterias a los antibióticos, los problemas ecológicos asociados con bacterias resistentes, los químicos tóxicos y el aparecimiento posterior de drogas restringidas en los tejidos de los camarones, hicieron necesario buscar otras vías biológicas para el control de las enfermedades. La alternativa de poder manipular la flora bacteriana y la ecología de los sistemas de larvicultura a través de la inoculación de bacterias beneficiosas es muy viable para que la fuente de postlarvas de laboratorio pueda continuar con establidad en el futuro.
En este campo, lo más novedoso que se plantea es la producción y utilización de probióticos para manipular la flora bacteriana en los laboratorios comerciales. Según Garriques y Arévalo (1995) existen varias teorías que explican el papel de los probióticos en los sistemas de Acuicultura: exclusión competitiva de bacterias patógenas; mejoramiento de la mutrición por el suminstro de nutrientes esenciales; incremento de la nutrición por el suminstro de enzimas esenciales; obtención directa de materia orgánca transformada por bacterias y producción de sustancias que inhiben el crecimiento de patógenos oportunistas. Esta práctica incluye el cultivo de cepas seleccionadas de bacterias beneficiosas que son inoculadas intencionalmente en los tanques de larvicultura.
Recientemente, han aparecido en el mercado productos elaborados con combinaciones de bacterias capaces de degradar materia orgánica y de bacterias nitrificantes que eliminan amonio del agua. Estos productos, de fácil manipulación y almacenamiento, además de las propiedades que poseen, evitan la necesidad de producir cultivos de bacterias en los laboratorios de acuicultura, reduciendo gastos de personal y de estructura adicional. Las referencias sobre la utilización de estos productos en los sistemas de cultivo de camarones marinos son escasas, no encontrándose ninguna para el caso de P. schmitti.
El objetivo de este trabajo fue probar el efecto que ejercen dos productos comerciales degradadores biológicos de resíduos orgánicos sobre la larvicultura del camarón blanco Penaeus schmitti.

AGRADECEMOS
Agradecemos a la Universidad Federal de Santa Catarina y al Consejo Nacional de Desarrollo Científico y Technológico (CNPq) de Brasil, la subvención de esta investigación. La Empresa Planaqua Tecnología Aquicultura de Brasil y M. Silva de Salinas, Ecuador cedieron los productos Alken Clear-Flo para las pruebas.

 MATERIALES Y METODOS
Los microorganismos vivos comercializados como Alken Clear-Flo 1000 y 1200 (ALKEN-MURRAY CORPORATION, 1994) presentan las siguientes características: ACF 1000.- Es un polvo de color marrón que contiene tres especies de Bacillus seleccionades (B. subtilis, B. licheniformis y B. polymyxa) capaces de producir una rápida reducción del exceso de alimento, de las heces, etc. ACF 1200.- Es un líquido de apariencia turbia que contiene 26 millón bacterias/ml. Es una combinación de Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Pseudomonas putida, P. stutzeri, P. fluorescens y Eneterobacter cloacae que degradan la materia orgánica en exceso. Además, están presentes las bacterias nitrificantes Nitrosomonas y Nitrobacter, que eliminan amonio del agua. Fueron realizados tres experimentos, el primero para evaluar si las dosis recomendadas para P. vannamei son adecuadas para larvas de P. schmitti sin afectar la subervivencia, la velocidad de metamorfosis y la calidad de los animales. La segunda prueba fue realizada con el fín de determinar la acción del producto sobre la calidad de agua, con tasas de renovación diaria reducidas de 100% para 30% a densidades de 100 larvas/litro. Un tercer experimento fue realizado en larvicultura de alta densidad para evaluar preliminarmente el efecto de ACF 1000 ante la presencia de la enfermedad conocida como "bolitas" en la fase de protozoea.
 (Manufacturer's note: ACF 1200 was improved in 1997, increasing the count to 500 million colony forming units of bacteria/ml and P.aeruginosa was replaced by two strains of P. putida, E. hermanii was replaced with Enterobacter cloacae and P. stutzeri was replaced by B. licheniformis. The improvement allows for a lower dose to be applied. ACF 1000 was improved in 1999 by substituting B. thuringiensis for B.polymyxa)

Dosificatión de los productos ACF 1000 y ACF 1200.
Estos productos son recomendados a partir del inicio del sub-estadio de Protozoea II para P. vannamei en Ecuador. La dosis para ACF 1000 des de 0,2 ppm inicialmente, aumentándose 0,1 ppm cada día después de la renovación del agua si fuera detectado algún problema en la larvicultura. Basándose en la presencia de la enfermedad de las "bolitas" o de una carga alta de materia orgánica en los tanques, se utilizan dosis iniciales de 0,5 ppm, pudiéndose llegar hasta 1 ppm en los días siguientes (Silva R., Laboratorio Mar Bravo, Salinas, Ecuador, com. personal, 1995). Para ACF 1200, el fabricante recomienda dosis diarias de 5 ppm para altos tenores de materia orgánica; 2,75 ppm para tenores medios y 0,5 ppm para bajos tenores. En este experimento se probaron las dosis recomendadas para P. vannamei, iniciándose antes la utilización de los productos, en este caso, al final de protozoea I. Fueron usados tanques cilindro-cónicos de fibra de vidrio con capacidad de 40 litros. Cuentan con una válvula en la parte inferior para la colocación del equipo de intercambio de agua. El volumen de agua utilizado fue de 30 litros. El agua de mar fue captada de la red principal del laboratorio, previamente filtrada por arena y por "cartuchos" de 5 micrómetros, con temperatura de entrada de 26°C conseguida mediante un equipo difusor de calor. A través del experimento la temperatura del aqua fue controlada en torno de ese valor con calentadores de 100 Watts en cada unidad experimental, los cuales están conectados a un termostato central. Fueron usados nauplios III de un desove, los cuales fueron seleccionados por fototactismo positivo e incubados a razón de 100 nauplios/litro. El diseño experimental aplicado aparece en la Tabla 1. Fueron tres tratamientos con cuatro repeticiones simultáneas, totalizando 12 unidades experimentales.



TABLA 1. TRATAMIENTOS UTILIZADOS CON LOS PRODUCTOS ALKEN CLEAR-FLO


First table
La tasa de renovación de agua diaria fue de 100% a partir de Protozoea II, adicionándose los productos después de la renovación de cada tanque, con la excepción de la primera aplicación en Protozoea I. La alimentación consistió de diatomeas (Chaetoceros calcitrans) a partir de Protozoea I que se ajustó tres veces por día a concentraciones de 80 millón cel/ml y de flagelados (Tetraselmis tetrathele) que se comenzó a ofrecer desde Protozoea II. Los parámetros biológicos considerados para analizar los resultados fueron: supervivencia diaria, calidad larval evaluada por observaciones al microscopio dos veces por día y velocidad de metamorfosis aplicando el Indice de Desarrollo de Villegas y Kanazawa (1979).


 

Efecto de los productos Alken Clear-Flo en la reducción de la tasa de renovación de agua.
Una función básica de estos productos es el control del amonio y de los nitritos, además de la degradación de exceso de materia orgánica presente en el sistema, constituido por restos de ración, heces, algas muertas, etc. Esto probablemente permite una reducción considerable de la tasa de renovación de agua, sin perjudicar la calidad de la misma. En esta prueba la tasa de renovación adoptada durante todo el período de experimentación fue de 30%. Las condiciones experimentales fueron iguales a las del experimento anterior. El experimento abarcó las fases desde NauplioIII hasta Postlarva1. A partir de Protozoea III la dosis de los productos se estabilizó en 0,5 ppm para ACF 1000 y en 5 ppm para ACF 1200, adicionados diaramente a las unidades experimentales después de efectuada la renovación del agua (30%). Los parámetros físico-quimicos registrados fueron: temperatura, pH y amonio no ionizado. Los parámetros biológicos observados fueron: supervivencia diaria, velocidad de metamorfosis y talla final alcanzada por los animales. Además fueron llevadas a cabo revisiones al microscopio evaluando la calidad larval en el decursar del experimento.
La alimentación de las larvas siguió el patrón utilizado por el Laboratorio de Camarões Marinhos-UFSC (Tabla 2).


 

TABLA 2. ALIMENTACION DE LAS LARVAS EN EL EXPERIMENTO DE LA REDUCCION DE
LA TASA DE RENOVACION DE AGUA.

Table 2


Evaluación del efecto de Alken Clear-Flo 1000 ante la presencia de "bolitas".
En los tanques de larvicultura de P. schmitti se probó de manera preliminar, el efecto que el producto ACF 1000 podría ejercer sobre la enfermedad conocida como "bolitas". En Ecuador, las larvas de P. vannamei son tratadas con este producto de manera profiláctica y curativa en sistemas comerciales. Se utilizaron dos tanques de fibra de vidrio de un volumen de 5 m3, de color blanco y fondo semi-circular. Los tanques fueron incubados a alta densidad (400 nauplios/litro) con larvas provenientes de diversos desoves del sector de maduración del Laboratorio. Fue utilazada agua de mar filtrada, del sistema del laboratorio, con slinidad de 34 o/oo y temperatura media de 26°C. Esta prueba fue desarrollada desde Nauplio III hasta Protozoea III, ya que comúnmente se observa la mortalidad ocasionada por este síndrome en el sub-estadio de Protozoea II.
La alimentación consistió de la microalga Chaetoceros calcitrans, mantenida a densidad de 80 mil cel/ml en las dos unidades experimentales, ajustándose tres veces por día. A partir del final del sub-estadio de Protozoea I, fue aplicado a uno de los tanques el tratamiento con ACF 1000, en la concentración inicial de 0,2 ppm, aumentándose 0,1 ppm diariamente hasta el final del experimento. Al segundo tanque no le fue adicionado ningún producto, siendo aplicada la metodología de cultivo del Laboratorio. Diariamente se determinó la supervivencia larval, revisándose también el estado de las larvas mediante observaciones al microscopio tres veces por día para constatar su calidad y la presencia de "bolitas".

RESULTADOS Y DISCUSION

Dosificatión de los productos Alken Clear-Flo 1000 y 1200.
La supervivencia alcanzada de Nauplio III a Protozoea III fue alta, no difriendo del patrón sin productos. En todos los tratamientos la supervivencia fue próxima al 100%.
No fueron observadas diferencias en cuanto al consumo de microalgas por parte de las larvas, según la verificación del residual efectuado tres veces por día.
La calidad de las larvas fue semejante entre los tratamientos. Las larvas se mantuvieron activas, con fototactismo positivo y con el tracto digestivo ocupado. La observación de los cordones fecales mostró que el alimento fue bien digerido durante todo el experimento en cada uno de los tratamientos. La velocidad de metamorfosis de Nauplio III a Protozoea III fue similar para todos los casos.
Basándose en estos resultados se pudo constatar que los tratamientos con Alken Clear-Flo 1000 y 1200 no causan mortalidad ni daño aparente a las larvas de P. schmitti durante la fase de protozoea, considerada como muy delicada dentro del ciclo de vida de los peneidos. Las dosis usadas para P. vannamei en Ecuador a partir de Protozoea II pueden ser aplicadas en P. schmitti desde Protozoea I. Consideramos la aplicación de los productos desde el final de este sub-estadio para garantizar que no se afectado por los mismos y proporcionar así una mayor seguridad en el tratamiento preventivo de las enfermedades, entre ellas, la del síndrome de descamación del epitelio del tracto digestivo que se manifiesta en Protozoea II.

Efecto de los productos Alken Clear-Flo en la reducción de la tasa renovación de agua.
Reduciendo la tasa de renovación de agua de 100% para 30% se registraron valores de los niveles de amonio total que estuvieron por debajo de los limites aceptables para las larvas de camarón (0,10 a 0,75 µg/litro), lo cual supone un efecto positivo de los productos sobre la calidad del agua. En el tratamiento patrón los niveles de amonio fueron superiores, apareciendo un precipitado blanco que indica exeso de materia orgánica según las indicaciones del kit utilizado para las mediciones. Los valores de pH encontrados estuvieron entre 7,5 y 8,0 para los tres tratamientos. A partir de Protozoea III comenzó a diferenciarse el comportamiento de la supervivencia de las larvas tratadas con respecto al patrón, encontrándose al final del experimento porcentajes muy superiores para postlarva1 como puede observarse en la Tabla 3. Estos resultados demuestran que existió un efecto positivo de los productos durante la fase larval.

TABLA 3. SUPERVIVENCIA ALCANZADA CON LOS PRODUCTOS ALKEN CLEAR-FLO.

Table 3


 En la Tabla 4 se puede observar que el crecimiento de los animales también se diferenció con la aplicación de los productos. Se obtuvo una talla de 4,36 mm para las postlarvas1 tratadas con ACF 1000, que resultó significativamente superior con respecto a ACF 1200 de 4,22 mm y al patrón sin productos de 4,14 mm que no se diferenciaron entre sí. Esto sugiere que el producto ACF 1000 también actúa como alimento para las larvas.



TABLA 4. TALLAS MEDIAS DE LAS POSTLARVAS TRATADAS CON ALKEN CLEAR-FLO.

Table 4

Ha sido señalado que el crecimiento de los animales está prácticamente determinado por la alimentación (Kuban y col., 1985; Alfonso y col., 1988). Criterios semejantes señalan Gallardo y col. (1995) que relacionan el crecimiento obtenido para larvas de P. setiferus con la dieta suministrada, y de hecho, con el estado fisiológico de los animales. Es conocido también de que las bacterias forman parte de la alimentación de los camarones, de manera que este "pool" de bacterias debe haber tenido alguna implicación en los resultados obtenidos con ACF 1000 en cuanto al crecimiento.
La calidad de las larvas en los primeros días (NIII - PIII) se mantuvo similar según las observaciones de la conducta y de la morfología. A partir de Mysis I hasta Postlarva 1, los animales de las unidades experimentales pertenecientes al tratamiento patrón sin productos mostraron suciedad en los apéndices, natación lenta y menor respuesta a la fuente de luz. Estas señales son características de la baja tasa de renovación de agua, ya que en esta fase hay necesidad de renovaciones mayores que 30%. Sin embargo, el efecto de los productos ACF 1000 y 1200, posibilita renovaciones menores por el papel que desempeñan las bacterias que contienen en la degradación de materia orgánica presente en los cuerpos de agua. Estos productos tienen una acción beneficiosa sobre la calidad del agua, y consecuentemente, sobre la supervivencia, la calidad de las larvas y su crecimiento.


 

Evaluación del producto Alken Clear-Flo 1000 ante la presencia de "bolitas".

 Se observaron diferencias en la supervivencia de las Protozoeas tratadas con ACF 1000 y las que no fueron tratadas:

Larvas tratadas: P II = 100% P III = 97,5%
Larvas no tratadas: P II = 94,3% P III = 56,0%
Estos resultados para P. schmitti son semejantes a los encontrados por Silva comunicación personal) en laboratorios comerciales de P. vannamei, utilizando el mismo producto. A través del microscopio fue observado que las larvas no tratadas presentaron la porción posterior del tracto digestivo vacío y además suciedad en los apéndices a partir de Protozoea II. Según los conteos de los residuales de las microalgas en los tanques, el consumo medio del alimento fue diferente:


Another table
Las larvas sin tratamiento consumieron menos algas en presencia de la enfermedad, mientras que las larvas tratadas presentaron siempre el tracto digestivo ocupado y las heces mostraron el alimento bien digerido. Fue observado también que las larvas no tratadas presentaron una respuesta deficiente a la luz y poca vitalidad comparadas con las larvas tratadas, además de aparecer con el tracto digestivo vacío, característica propia de animales con el síndrome de descamación del epitelio digestivo, según reporta Morales (1992) en P. vannamei.
Estos productos ejercieron un efecto positivo en el control de esta enfermedad causada por bacterias durante la fase larval de P. schmitti. Sería recomendable la ejecución de pruebas para los estadios postlarvales, así como también experimentar con otros productos.
Por los resultados obtenidos, estos productos preparados con combinaciones de bacterias beneficiosas presentan buenas perspectivas de utilización para procesos intensivos de larvicultura de P. schmitti.

CONCLUSIONES
Es posible el uso de microorganismos vivos degradadores de resíduos orgánicos comercializados (A a partir de Protozoea I de Penaeus schmitti.
Los productos ACF 1000 y 1200 posibilitan la reducción de la tasa de renovación de agua de 100% para 30% al día en la cría de larvas a altas densidades.
Estos productos evitaron la aparición de la enfermedad de las "bolitas" en protozoeas de P. schmitti en tanques de larvicultura intensiva.

REFERENCIAS

Alfonso, E., L. Martínez, R. Gelabert y S. Leal (1988): Alimentación de larvas del camarón Penaeus schmitti. I. Diatomeas y flagelados. Rev. Invest. Mar., 9 (1):47-58.



ALKEN-MURRAY CORPORATION (1994): Waste degrader for Aquaculture. Product Information Bulletin, New York, pp: 1-8.



Gallardo, P. P., E. Alfonso, G. Gaxiola, L. Soto y C. Rosas (1995): Feeding schedule for Penaeus setiferus larvae based on diatoms (Chaetoceros ceratosporum), flagellates (Tetraselmis chuii) and Artemia nauplii. Aquaculture 131: 239-252.



Garriques, D. y G. Arevalo (1995): An evaluation of the production and use of a live bacterial isolate to manipulate the microbial flora in the commercial production of Penaeus vannamei postlarvae in Ecuador. In: Proceedings of the Special Session on Shrimp Farming of the World Aquaculture Society (Aquaculture '95), Feb/95, San Diego California, pp: 53-59.



Kuban, F. D., A. L. Lawrence y J. S. Wilkenfeld (1985): Survival, metamorphosis and growth of larvae from four peneids species fed six food combinations. Aquaculture, 47: 151-162.



Morales, I. (1992): Observaciones sobre el síndrome de descamación del epitelio digestivo "Bolitas" en larvas de Penaeus vannamei en Ecuador. Memorias del I Congreso Ecuatoriano de Acuicultura, Guayaquil, Ecuador, pp: 203-208.



Villegas, C. y A. Kanazawa (1979): Relationship between diet composition and growth of the zoeal and mysis stages of Penaeus japonicus Bate. Fish Res. J. Philipp., 4:32-40.

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